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        酵母感受态细胞

        YM4271

        文字:[大][中][小] 2019-5-28    浏览次数:2922    

        YM4271 Chemically Competent Cell 产品说明书



         

        产品规格 (CAT#: YC1090)

        YM4271 Competent Cell:                                        100μl/支            保存: -80℃(3个月)

        pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)                           10μl               保存:-80℃(12个月)

        Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存:-20℃(12个月)

        PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12个月)


        基因型

        MATa, ura3–52, his3-Δ200, ade2–101, ade5, lys2–801, leu2–3,112, trp1–901, tyr1–501, gal4Δ, gal80Δ, ade5::hisG


        产品说明

        YM4271菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为:trp1leu2ura,报告基因为: HIS3。可用于酵母双杂,酵母单杂或异源蛋白表达等试验。YM4271感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

         

        操作方法

        1. 取100 μl冰上融化的YM4271感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 μg,Carrier DNA (95-100℃,5 min,快速冰浴,重复一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

        2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

        3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。

        4. ddH2O 50 μl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。


        注意事项

        1. 感受态细胞最好在冰上融化。

        2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

        3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

        4. YM4271酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

        5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

        6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。




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        YM4271 Chemically Competent Cell 产品说明书


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