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        EPI300

        文字:[大][中][小] 2018-1-31    浏览次数:4702    

        EPI300 Chemically Competent Cell 产品说明书 




        产品规格 (CAT#: DL1084)

        EPI300:                                                         100μl/支

        pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl

        保存条件(保质期):                         -80℃(6个月)


        基因型

        F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr.


        产品说明

        EPI300细胞含有一个突变的trfA基因,该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁,诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时,trfA基因的表达被抑制,ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平;当在培养基中加入诱导剂Ⅰ,ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平,提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳动物基因组DNA)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其链霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达3×108cfu/μg DNA。




        操作方法

        1. EPI300感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

        2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

        3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

        4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或

            LB培养基上。

        5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15 h。




        注意事项

           感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。







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        EPI300 Chemically Competent Cell 产品说明书

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