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        EPI400

        文字:[大][中][小] 2017-8-24    浏览次数:3386    

        EPI400 Chemically Competent Cell 产品说明书 




        产品规格 (CAT#: DL1085)

        EPI400:                                                         100μl/支

        pUC19 (control vector,10pg/μl):                     10μl

        保存条件(保质期):                         -80℃(6个月)


        基因型

        F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr


        产品说明


        EPI400来源于EC100菌株,将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pcnB基因,即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆,在加入WDEPI-诱导剂 I 后又可以提高质粒产量到正常状态。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选,tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力,rpsL赋予其链霉素抗性。EPI400感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达5×107 cfu/μg DNA。



        操作方法

        1. EPI400感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

        2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

        3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

        4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

        5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15 h。


        注意事项

        1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中10分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。




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        EPI400 Chemically Competent Cell 产品说明书

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