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        BY4741

        文字:[大][中][小] 2017-12-4    浏览次数:3097    

                    BY4741 Chemically Competent Cell 产品说明书



         

        产品规格 (CAT#: YC1060)

        BY4741 Competent Cell:                                      100μl/支             保存: -80℃(3个月)

        pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                               10μl              保存:-80℃(12个月)

        Carrier DNA (5 μg/μl)                                              100μl              保存:-20℃(12个月)

        PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12个月)


        基因型

        MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52


        产品说明

        BY4741菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C,是实验室的常用菌株,为配子MATa型,广泛应用于钠,钾离子平衡;细胞抗盐;各种金属离子的吸收;重金属毒性;各种糖类,碳源对真核生物细胞生长的影响;过氧化物,超氧化物的吸收与运输的研究中。BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4741细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板板进行筛选。唯地生物生产的BY4741感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pYES2质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

         

        操作方法

        1. 取100 μl冰上融化的BY4741感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒1-3 μg,Carrier DNA (96℃水浴3 min,快速冰浴

        3 min,重复一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

        2. 将感受态移到42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

        3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。

        4. ddH2O 50 μl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。


        注意事项

        1. 感受态细胞最好在冰上融化。

        2. 若使用pYES2质粒表达蛋白,需在培养基中加入2%的半乳糖(筛选培养基中不用加半乳糖;当需要目的蛋白表达时,需加入半乳糖代替葡萄糖作为碳源),以诱导目的基因的表达。

        3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

        4. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

        5. 酵母为真核生物,不易长期保存,随感受态在-80℃保存时间的延长,转化效率会不断下降,建议保存时间不超过90天。

        6. BY4741酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

        7. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。


        说明书下载

        BY4741 Chemically Competent Cell 产品说明书


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