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        酵母感受态细胞

        INVSc1

        文字:[大][中][小] 2017-9-24    浏览次数:5610    

                    INVSc1 Chemically Competent Cell 产品说明书




        产品规格 (CAT#: YC1050)

        INVSc1 Competent Cell:                                      100μl/支              保存: -80℃(3个月)

        pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                              10μl               保存:-80℃(12个月)

        Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存:-20℃(12个月)

        PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12个月)


        基因型

        MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 


        产品说明

        INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母,pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用,激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板进行筛选。INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pYES2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

         

        操作方法

        1. 取100 μl冰上融化的INVSc1感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 μg,Carrier DNA (95-100℃,5 min,快速冰浴,重复一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

        2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

        3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。

        4. ddH2O 50 μl重悬,涂质粒筛选用:SD-U medium板,29℃培养48-96 h。



        注意事项

        1. 感受态细胞最好在冰上融化。

        2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

        3. INVSc1酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。



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        INVSc1 Chemically Competent Cell 产品说明书


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